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Tópicos Especiales de Ingeniería Genética

Docentes:

Dr. Lagares, Antonio

Programa teórico: 22 hs

– CELULAS Y GENES. Panorama general de estructuras y función celulares. Células eucarióticas y procarióticas. Macromoléculas: ácidos nucleicos y proteínas, síntesis, estructura y funciones. Requisitos funcionales y estructurales del material genético: codificación y conservación de la información, replicación, expresión y variación. Gen: puntos de vista estructural versus funcional u operacional. Organización interna de los genes: secuencias estructurales (codificantes) y secuencias regulatorias (no codificantes) en bacterias, virus, plantas y animales

– REGULACION DE LA EXPRESION GENETICA. Regulación pretranscripcional: rearreglos de secuencias locales de ADN (genes de inmunoglobulinas).Efectos de posición. Dominios cromatínicos. Regulación transcripcional: interacción ARN polimerasa-promotor (operón lactosa). Comparación de las soluciones al problema de expresión coordinada de genes en pro- y eucariontes (activación de un operón versus activación simultánea de genes independientes) Controles postranscripcionales: procesamiento del ARN (“splicing” de intrones), supresión y cambios de marco de lectura en virus. Controles postraduccionales: procesamiento de poliproteínas.

– GENETICA DE MICROORGANISMOS. Recombinación. Conjugación. Transducción generalizada y especializada. Transformación. Plásmidos:propiedades generales y asociadas (resistencia a antibióticos, bacteriocinas, toxinas, fermentación, etc.). Bacteriófagos temperados y virulentos: ciclos lítico y lisogénico. Fago lambda y M13. Organización y estrategias genéticas de virus animales. Metodología de clonado y concepto de clon heterogéneo, variabilidad y teoría de las cuasiespecies. –

RESTRICCION, MODIFICACION Y CLONADO DEL ADN Enzimas para la manipulación del ADN: endonucleasas de restricción, transcriptasa reversa, ligasas, polimerasas. Principales técnicas y estrategias para el clonado de genes en bacterias. Vectores: plásmidos, fagos, fásmidos y cósmidos, cromosomas artificiales (BACs y YACs). Generación de bancos o clonotecas de cADN y genotecas. Técnica para el estudio de la organización genética: mapeo de restricción, secuenciación nucleotídica, Southern, Northern, Western, , etc. Mutagénesis dirigida. Amplificación de genes mediante PCR, aplicaciones

– SISTEMAS DE EXPRESION. Expresión de proteínas recombinantes: bacterias, levaduras, baculovirus, plantas y animales.

– UTILIZACION DE LAS TECNICAS DE INGENIERIA GENETICA Producción de reactivos de diagnóstico: concepto de sonda molecular, hibridación “in situ”, PCR, uso de proteínas recombinantes. Vacunas recombinantes: uso de distintos vectores (virales, bacterianos, plantas), vacunas a bacterias y virus modificados, etc.

– MEJORAMIENTO ANIMAL Y VEGETAL Transferencia de genes en animales: microinyección de óvulos fecundados, ejemplos de ratones transgénicos, hormona de crecimiento, genes marcadores selectivos, proteínas de interés farmacéutico. Clonación. Transferencia de genes en plantas: sistema biolístico y con Agrobacterium, plantas transgénicas, ejemplos de plantas resistentes a insectos y a herbicidas. Vegetales “productores” de fármacos. Vegetales con propiedades mejoradas.

– Programa práctico (8 horas): Práctico 1 (4 horas) Transformación bacteriana por el uso de plásmidos.

– Identificación de productos de expresión. Práctico 2 (4 horas) Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Identificación de genes heterólogos.